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      ELISA试剂盒 > > 豚鼠ELISA试剂盒
      豚鼠基质金属蛋白酶-3ELISA试剂盒
      豚鼠基质金属蛋白酶-3ELISA试剂盒
      品名:
      豚鼠基质金属蛋白酶-3ELISA试剂盒
      货号:
      F15365-A
      产品品牌:
      科兴,TSZ
      价格:
      快速询价  QQ索要说明书 电话:15902171569
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      豚鼠基质金属蛋白酶-3酶联免疫分析

      试剂盒使用说明书

      本试剂盒仅供研究使用。

      检测范围:                                                          96T

      1.5μg/L -45μg/L

       

      使用目的:

      本试剂盒用于测定豚鼠血清、血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-3含量。

      实验原理

      本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中豚鼠基质金属蛋白酶-3水平。用纯化的豚鼠基质金属蛋白酶-3抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶-3,再与HRP标记的基质金属蛋白酶-3抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶-3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中豚鼠基质金属蛋白酶-3浓度。

      试剂盒组成

      1

      30倍浓缩洗涤液

      20ml×1

      7

      终止液

      6ml×1

      2

      酶标试剂

      6ml×1

      8

      标准品(80μg/L

      0.5ml×1

      3

      酶标包被板

      12孔×8

      9

      标准品稀释液

      1.5ml×1

      4

      样品稀释液

      6ml×1

      10

      说明书

      1

      5

      显色剂A

      6ml×1

      11

      封板膜

      2 

      6

      显色剂B

      6ml×1/

      12

      密封袋

      1

      标本要求

      1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

      2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

      操作步骤

      1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

      40μg/L

      5号标准品

      150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

      20μg/L

      4号标准品

      150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

      10μg/L

      3号标准品

      150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

      5μg/L

      2号标准品

      150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

      2.5μg/L

      1号标准品

      150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

       

       

      2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

      3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

      4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

      5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

      7.         温育:操作同3

      8.         洗涤:操作同5

      9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

      10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

      操作程序总结:

       

      计算

        以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

      注意事项

      1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

      2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

      3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

      4.  请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

      5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.底物请避光保存。

      7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

      8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

      9.本试剂不同批号组分不得混用。

      10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

      保存条件及有效期

      1.试剂盒保存:;2-8

      2.有效期:6个月

       

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